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熒光PCR凍干保護劑之甘油 2020-08-03

多元醇類凍干保護劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側金盞花醇等，這一類凍干保護劑是比較常用較為普遍的凍干保護劑。以甘油作為凍干保護劑來介紹一下在蛋白質(zhì)凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力，可以進入細胞內(nèi)部和胞內(nèi)大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分，從而維持蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質(zhì)的原有結構。此外，甘油還可以起到降低細胞脫水皺縮和緩解復水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團，均能產(chǎn)生“優(yōu)先水化作用”以及改變體系的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變溫度等，... 查看更多
熒光PCR凍干之二糖 2020-08-02

二糖又名雙糖,雙糖是碳水化合物的一種。它是由兩個單糖分子經(jīng)縮合反應除去一個水分子而成的糖。例如乳糖由葡萄糖和半乳糖組成，蔗糖由葡萄糖和果糖組成，麥芽糖由兩個葡萄糖組成等。二糖作為常用的凍干保護劑，能夠有效增加蛋白凍干穩(wěn)定性，但是用它們作保護劑得到的無定形蛋白凍干固體具有較低的Tg，對儲存過程中的高溫和高濕條件耐受較差。大分子量糖能夠增加凍干后固體的Tg，增加凍干后穩(wěn)定性，但是對于低濃度蛋白活性保護作用不理想。例如蔗糖對蛋白質(zhì)具有保護作用，葡聚糖在冷凍和干燥過程中不能防止蛋白質(zhì)... 查看更多
熒光PCR凍干之聚合物 2020-08-02

聚合物又稱加聚物。由一種單體經(jīng)聚合(加聚)反應而成的產(chǎn)物。分子具有重復的結構單位。包括晶態(tài)結構、非晶態(tài)結構、取向態(tài)結構以及織態(tài)結構。聚合物包括聚乙二醇、PVP、明膠、聚乙烯亞胺等。聚合物常用作為蛋白質(zhì)的冷凍保護劑，通常聚合物的穩(wěn)定作用取決于聚合物的多重性質(zhì),如優(yōu)先從蛋白質(zhì)表面析出、表面活性、使蛋白質(zhì)溶液私度升高從而阻止其他小分子(如糖及多輕基化合物)的結晶、抑制冷凍過程中pH值的劇烈變化等。不同聚合度及濃度的聚合物所提供的保護作用不同,如聚合度大的PvP有著較高的玻璃化溫度,... 查看更多
熒光PCR凍干之氨基酸 2020-08-01

氨基酸是含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。目前發(fā)現(xiàn)的天然氨基酸就有300多種，基本氨基酸也有二十個品鐘。氨基酸應用于食品行業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)、化妝品行業(yè)等。氨基酸是常見的蛋白質(zhì)保護劑之一。在冷凍過程中,低濃度的甘氨酸可通過抑制10或100mmol/L磷酸緩沖鹽結晶所致pH值的改變而阻止蛋白質(zhì)藥物變性。無定型甘氨酸可阻止凍干過程中重組人生長激素的聚集;結晶型甘氨酸能升高成品的塌陷溫度,阻止因塌陷而引起的蛋白質(zhì)藥物的破壞。常用的氨基酸類蛋白質(zhì)保護劑有脯氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸... 查看更多
熒光PCR之探針法 2020-07-28

熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質(zhì)探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高，區(qū)別染色體上一個堿基的突變；由于其鏈短，分子量小，雜交時間較短（僅需1-2小時），可預測雜交條件，可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆，獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低，也影響了檢測的敏感性，僅能檢出含很少的標本。cDNA探針以RNA為模板，用反... 查看更多
熒光PCR凍干之DMSO 2020-07-27

二甲基亞砜（DMSO）是一種有機化合物，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。具有高沸點、熱穩(wěn)定性好、與水混溶的特性?？勺饔袡C溶劑、反應介質(zhì)和有機合成中間體。也可用作合成纖維的染色溶劑、去染劑、染色載體,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收劑。二甲基亞砜是一種既溶于水又溶于有機溶劑。廣泛用作溶劑和反應試劑，具有很高的選擇抽提能力。二甲基亞砜是如何應用的呢？下面簡單介紹下，DMSO是一種重要的滲透型細胞保護劑。培養(yǎng)液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%；1‰... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之甲酰胺 2020-07-26

甲酰胺是一種化合物，無色透明液體，略有氨味，是合成醫(yī)藥、香料、染料等的原料，也可作為溶劑用于合成纖維的抽絲、塑料加工、木質(zhì)酪素墨水的生產(chǎn)等。通過甲酸甲酯和氨的反應制備甲酰胺的方法。甲酰胺是可作為溶劑、有機合成原料、醫(yī)藥原料等的在工業(yè)上有用的物質(zhì)。甲酰胺是被較早發(fā)現(xiàn)并應用的PCR凍干保護劑之一，能促進引物模板退火，能提高PCR反應的特異性。分享下熒光PCR試劑凍干的示例：(1)將熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、熱啟動Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、... 查看更多
熒光PCR凍干之PVP 2020-07-25

聚乙烯吡咯烷酮簡稱PVP,是一種非離子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺類聚合物中被研究得深、廣泛的精細化學品品種。應用于醫(yī)藥、化妝品、食品等行業(yè)?？勺稣澈蟿⒃鋈軇?、分散或共研磨劑、活性成分穩(wěn)定劑等。PVP按其平均分子量大小分為四級，用K值表示，K值實際上是與PVP水溶液的相對粘度有關的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關的物理量，一般K值越大，其粘度越大，粘接性越強。熒光PCR凍干時，PVP能夠增強PCR產(chǎn)物生成量，其中PVP也能有效提高PCR效率和特異性。PVP作為PCR... 查看更多

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